Signal Transduction and Targeted Therapy | Hypoxia induced VEGF secretion promotes resistance to bispecific T-cell engagers

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文献概述
本文《缺氧诱导VEGF分泌促进对双特异性T细胞衔接剂的耐药性》，发表于《Signal Transduction and Targeted Therapy》杂志，回顾并总结了MUC16/CA125靶向双特异性抗体在卵巢癌治疗中的耐药机制。研究通过收集患者进展期样本，结合CRISPR/Cas9基因编辑模型和体外实验，发现缺氧微环境不仅导致CA125表达下调，还促进VEGF分泌和EMT转化，从而抑制BITE介导的细胞毒性。此外，研究还验证了VEGF抑制剂贝伐单抗在恢复BITE疗效中的作用，提示联合治疗可能具有临床转化潜力。

背景知识
双特异性T细胞衔接剂（BITE）是一种新型免疫治疗手段，通过同时靶向肿瘤相关抗原和T细胞受体（如CD3），将多克隆T细胞重定向至肿瘤细胞，从而激活T细胞介导的肿瘤杀伤。MUC16（CA125）是高分级浆液性卵巢癌中广泛表达的肿瘤相关抗原，因此成为BITE治疗的重要靶点。然而，尽管已有针对MUC16的BITE进入早期临床试验，耐药机制仍未被完全阐明。当前研究通过分析耐药患者样本，发现缺氧是驱动抗原下调和VEGF分泌的关键因素，而缺氧微环境在实体瘤中普遍存在，与免疫抑制和耐药相关。此外，研究进一步验证了VEGF在BITE耐药中的作用，为联合VEGF抑制剂提供了实验支持。这些发现拓展了对BITE耐药机制的理解，并为改善实体瘤免疫治疗提供了新的方向。

研究方法与实验
研究团队收集了接受MUC16-BITE治疗后疾病进展患者的血清、外周血单个核细胞（PBMC）和腹水样本。通过Western blot、ELISA、流式细胞术等方法分析CA125表达、VEGF分泌及EMT标志物。在体外模型中，使用缺氧培养系统模拟肿瘤微环境，评估缺氧对CA125表达和EMT转化的影响。此外，通过CRISPR/Cas9技术构建MUC16和VEGF敲除细胞系，验证抗原表达和耐药机制。进一步评估PBMC在不同条件下（如添加患者血清或VEGF抑制剂）的细胞毒性活性，以明确耐药机制的来源。

关键结论与观点

• 在进展期卵巢癌患者中，MUC16/CA125表达下调，同时伴随VEGF分泌增加和EMT表型出现。
• 缺氧微环境是MUC16/CA125下调和VEGF分泌上调的主要驱动因素。
• 尽管MUC16/CA125表达恢复，缺氧条件下VEGF分泌仍抑制BITE介导的细胞毒性。
• 使用VEGF抑制剂（贝伐单抗）可显著恢复缺氧条件下BITE的抗肿瘤活性。
• PBMC在体外仍具有细胞毒活性，表明耐药主要源于肿瘤微环境，而非免疫细胞功能缺陷。
• 缺氧培养系统中，肿瘤细胞的迁移和侵袭能力增强，与EMT表型一致。

结语
本研究系统分析了卵巢癌患者对MUC16/CA125靶向BITE耐药的机制，发现缺氧微环境通过促进VEGF分泌和EMT转化，导致抗原表达下调和T细胞介导的细胞毒活性受抑。研究进一步证实，VEGF抑制剂贝伐单抗可在体外恢复BITE疗效。这些发现为克服BITE耐药提供了新的治疗策略，提示靶向VEGF或可增强BITE在实体瘤中的临床应用。研究不仅揭示了缺氧-VEGF-EMT信号轴在免疫治疗耐药中的核心作用，也为未来的联合治疗方案提供了理论依据。

抗体人源化

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