Journal of Extracellular Vesicles | 精准递送系统通过ARMM微囊泡实现细胞特异性治疗

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文献概述
本文《Targeted Intracellular Delivery via Precision Programming of ARRDC1-Mediated Microvesicles》，发表于《Journal of Extrellular Vesicles》杂志，回顾并总结了非病毒载体在细胞特异性递送中的研究进展。研究重点在于通过表面工程改造ARMMs（ARRDC1介导的微囊泡），实现mRNA和CRISPR-Cas9基因编辑工具的精准递送。

背景知识
细胞特异性递送一直是RNA和基因疗法开发中的核心挑战。目前，病毒载体如AAV和慢病毒虽然具有较高的转导效率，但存在基因组整合、免疫原性及组织特异性受限等问题。非病毒系统如脂质纳米颗粒（LNPs）和细胞穿透肽在递送效率、毒性及免疫反应方面仍有不足。ARMMs是一类由细胞膜直接出芽形成的微囊泡，具有天然膜蛋白整合能力，同时避免了内体降解途径，为递送系统提供了一种新的非整合性、非病毒性选择。本研究通过在ARMMs表面展示Nipah病毒（NiV）衍生的融合蛋白与靶向配体，如抗CD8-scFv或GluA4-DARPin，实现对特定细胞类型的高效递送。该方法为递送工具的可编程性与模块化提供了理论基础，也为基因疗法在肿瘤免疫治疗、神经退行性疾病及罕见病中的应用提供了新的技术路径。

研究方法与实验
研究团队通过基因工程手段在HEK293T细胞中表达ARRDC1融合蛋白，并共转染NiV-G和NiV-F蛋白，其中NiV-G蛋白被改造为携带细胞特异性配体（如抗CD8-scFv或GluA4-DARPin）。随后，ARMMs通过超速离心与碘克醇梯度纯化进行分离，并通过NanoFCM、Western blot、免疫金标记及流式细胞术进行表征。动物实验中，Ai14转基因小鼠被用于评估Cre重组酶在CD8+脾细胞和PV+神经元中的递送效率，通过流式细胞术和免疫组化分析验证体内靶向能力。

关键结论与观点

• CD8-scFv修饰的ARMMs在体外可实现约50%的CD8+ T细胞特异性GFP表达。
• 在小鼠模型中，CD8-DARPin修饰的ARMMs可实现约7%的CD8+脾细胞Cre介导的tdTomato表达，而对照组仅有约1%。
• GluA4-DARPin修饰的ARMMs在小鼠前扣带皮层和视觉皮层中实现了超过50%的PV+神经元特异性Cre递送。
• ARMMs的大小、浓度及产量在表达NiV蛋白后无显著变化，证明其稳定性与可编程性。
• ARMMs在体外和体内均表现出低毒性，且无显著免疫激活或病理变化。

结语
该研究通过表面工程改造ARMMs，构建了一种可编程、非病毒的靶向递送系统，能够实现对CD8+ T细胞和PV+神经元的高效、特异性递送。该平台为mRNA和CRISPR疗法在精准医学中的应用提供了新的工具，尤其适用于需要避免基因组整合与免疫原性反应的治疗场景。ARMMs的非整合特性、高效载药能力及其表面可编程性，使其成为未来基因治疗和RNA疗法中极具潜力的递送载体。

纳米抗体人源化 (Llamanade)

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纳米抗体（Nbs）最近作为一种有前景的抗体片段，逐渐在生物医学和治疗应用中受到关注。尽管它们具备显著的物理化学特性，但由于 Nbs 来源于骆驼类动物，可能需要进行“人源化”处理，以增强其在临床试验中的应用潜力。Llamanade的作者们系统地分析了基于下一代测序（NGS）数据库和高分辨率结构的 Nbs 的序列和结构特性。他们的研究揭示了 Nbs 的框架多样性，并强调了它们与人类免疫球蛋白 G（IgG）抗体之间的关键差异。此外，他们还识别出了一些保守残基，这些残基可能有助于提高 Nbs 的溶解度、结构稳定性和抗原结合能力，为 Nbs 的人源化提供了重要的参考。