Drug Testing and Analysis | 黑市ACE-031的凝胶电泳检测研究

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本文通过凝胶电泳和质谱分析揭示，市面上的黑市ACE-031产品并非真正的ACVR2B-Fc融合蛋白，而是全长人activin受体2B蛋白。这为反兴奋剂检测提供了新策略，同时强调了黑市产品的不一致性与潜在检测挑战。

 

文献概述
本文《Gel Electrophoretic Detection of Black Market ACE-031》，发表于Drug Testing and Analysis杂志，回顾并总结了世界反兴奋剂机构（WADA）禁止的药物ACE-031在黑市中的真实成分及其检测方法的研究。文章通过SDS-PAGE、Western blot、质谱分析等技术，对14种黑市ACE-031产品进行了系统分析，发现其中12种含有全长activin受体2B蛋白而非预期的ACVR2B-Fc融合蛋白，另外两种产品甚至不含ACE-031相关蛋白，而是follistatin或ipamorelin。

背景知识
ACE-031（Ramatercept）是一种可溶性ACVR2B-Fc融合蛋白，通过捕获myostatin等配体来促进肌肉生长，因此被WADA列为增强表现的违禁物质。尽管该药物在临床试验中显示出增加肌肉质量的潜力，但因安全性问题未被批准上市。然而，黑市仍将其作为研究化学品出售，尤其面向健美和运动人群。由于ACE-031尚未获批，黑市产品的真实性、纯度和成分均存在显著不确定性，给反兴奋剂检测带来挑战。本研究旨在验证黑市产品的成分，并优化适用于人血清的检测方法，同时通过动物模型研究其体内清除动力学。由于人体实验伦理限制，研究最终采用大鼠模型进行药代动力学分析，进一步支持检测方法的适用性。

 

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研究方法与实验
研究团队对14种来自不同供应商的黑市ACE-031产品进行SDS-PAGE和Western blot分析，其中12种产品显示出约58.4 kDa的ACVR2B免疫反应性蛋白，与标准药物luspatercept（另一种ACVR2B-Fc融合蛋白）分子量一致，但成分分析显示其缺乏Fc结构域，且质谱分析揭示其为全长activin受体2B而非融合蛋白。进一步通过IdeS蛋白酶切实验，验证其无Fc结构域。随后，基于已有的针对luspatercept的检测方法，研究团队在大鼠模型中验证该方法是否适用于黑市ACE-031检测，并通过血清采集分析其在体内的清除时间。

关键结论与观点

• 14种黑市ACE-031产品中，仅12种含有ACVR2B蛋白，其余两种为follistatin和ipamorelin。
• 所有12种ACVR2B产品均无Fc结构域，且质谱分析确认其为全长activin受体2B，表明其为原核表达蛋白而非哺乳动物系统表达的融合蛋白。
• 基于针对luspatercept的检测方法（免疫亲和纯化结合Western blot），可有效应用于黑市ACE-031检测，且在大鼠血清中可检测至48小时。
• 黑市ACE-031在大鼠体内的检测窗口约为48小时，但人用剂量（0.02–3 mg/kg）与代谢差异可能导致检测窗口不同。

研究意义与展望
本研究揭示黑市ACE-031产品与正品分子的结构差异，为反兴奋剂检测提供了新的生物化学分析方法，并强调了基于受体全长蛋白的检测策略。未来研究可进一步优化检测灵敏度，并评估不同物种代谢差异，以更准确预测人体清除动力学。此外，黑市产品的不一致性也凸显了监管与检测方法标准化的必要性。

 

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结语
本研究系统分析了黑市ACE-031产品的分子特征，发现其并非真正的ACVR2B-Fc融合蛋白，而是全长activin受体2B蛋白，且部分产品成分与描述不符。研究团队成功应用已有的检测方法识别黑市ACE-031，并在大鼠模型中验证其体内清除动力学。该研究不仅为反兴奋剂检测提供了实用工具，也强调了黑市产品成分的不确定性及其对兴奋剂控制的挑战。未来，进一步的人体代谢研究和检测方法优化将是关键方向。

 

Christian Reichel, Thomas Filip, Günter Gmeiner, and Mario Thevis. Gel Electrophoretic Detection of Black Market ACE‐031. Drug Testing and Analysis.