Frontiers in Immunology | 靶向HER2和HER3的三特异性eFab-eIg T细胞衔接抗体

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本研究基于eIg技术开发了三特异性T细胞衔接抗体（TCE），靶向HER2、HER3和CD3，有效提升T细胞对肿瘤细胞的杀伤力。文章展示了该分子在2D和3D细胞模型中的强效抗肿瘤活性。

 

文献概述
本文《Trispecific eFab-eIg T-cell engagers targeting HER2 and HER3》，发表于《Frontiers in Immunology》杂志，回顾并总结了三特异性T细胞衔接抗体的构建及其对HER2和HER3双阳性肿瘤细胞的杀伤效果。研究还比较了不同双特异性抗体和三特异性抗体在抗原结合、T细胞激活和细胞毒性方面的表现。

背景知识
HER2和HER3是表皮生长因子受体（EGFR）家族成员，常在多种癌症中高表达，尤其在乳腺癌和胃癌中。HER2过表达与肿瘤进展相关，而HER3的表达常作为耐药机制出现。尽管已有针对HER2的单克隆抗体如曲妥珠单抗用于临床，但耐药性仍是一大挑战。双特异性抗体（BsAb）和三特异性抗体（TsAb）为同时靶向多个抗原提供了新策略，尤其在T细胞衔接治疗中，可增强T细胞介导的肿瘤杀伤并提高靶向特异性。本研究通过eIg技术平台构建了靶向HER2、HER3和CD3的三特异性抗体，拓展了双特异性抗体技术在肿瘤免疫治疗中的应用，为克服HER2靶向治疗耐药提供新思路。

 

构建靶向CD3的T细胞衔接抗体，提供从模型构建到药效评估的全流程支持，适用于免疫治疗和抗体药物开发。

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研究方法与实验
研究人员利用eIg技术，将Fab片段与两个eFab结构融合，构建不对称的三特异性抗体分子。其中，一个eFab靶向CD3，另一个eFab靶向HER3，而Fab臂靶向HER2。所有抗体在HEK293细胞中表达并纯化，通过SDS-PAGE、尺寸排阻色谱（SEC）和动态光散射（DLS）分析其结构完整性与稳定性。通过ELISA、流式细胞术（FACS）和2D/3D细胞毒性实验评估抗体结合能力及功能活性。

关键结论与观点

• 三特异性eFab-eIg抗体成功保留了对HER2、HER3和CD3的结合能力，EC50值分别为0.7 nM、5.6 nM和45.8 nM，显示其具备多重抗原识别能力。
• 在流式细胞术中，该抗体能有效结合HER2和HER3高表达细胞系，且结合强度与受体表达水平正相关。
• 2D细胞毒性实验中，三特异性抗体在不同细胞系中均显示出有效的T细胞介导杀伤，尤其在HER2高表达的BT474细胞中EC50低至0.0022 nM。
• 3D球状体杀伤实验显示，三特异性抗体在PBMC存在下可有效诱导肿瘤细胞凋亡，且杀伤效率与PBMC密度和抗体浓度呈正相关。
• 通过检测细胞因子释放（IL-2、IFNγ、IL-6、TNFα），研究确认三特异性抗体能有效激活T细胞并诱导免疫应答，但HER3xCD3双特异性抗体的激活效果较弱。

研究意义与展望
本研究展示了一种可同时靶向HER2、HER3和CD3的三特异性抗体，为双抗原表达肿瘤的免疫治疗提供了新策略。未来可进一步优化抗体结构，提高CD3结合效率，降低空间位阻，以增强T细胞活化和肿瘤细胞杀伤。此外，该技术平台可拓展至其他肿瘤抗原组合，为个体化免疫治疗提供支持。

 

提供人源化免疫系统小鼠模型，支持肿瘤免疫治疗、自身免疫疾病及感染模型研究，适用于CD3相关抗体验证与体内实验。

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结语
本研究成功构建了一种三特异性T细胞衔接抗体，靶向HER2、HER3和CD3，具备良好的抗原结合能力和细胞毒性。研究证明，该分子在2D和3D模型中均能有效激活T细胞并杀伤不同抗原表达水平的肿瘤细胞，尤其在HER2高表达细胞中表现出超强杀伤力。三特异性抗体的构建为多抗原靶向治疗提供了新思路，未来可通过优化结合位点排列，提高T细胞衔接效率，进一步增强抗肿瘤活性。

 

Ann-Kathrin Löffler, Annika Huber, Monilola A Olayioye, Roland E Kontermann, and Oliver Seifert. Trispecific eFab-eIg T-cell engagers targeting HER2 and HER3. Frontiers in Immunology.