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该研究建立了一种改良的外周血单个核细胞（PBMC）培养体系，通过添加IL-4、IL-21、BAFF及抗CD40激动抗体，以支持B细胞存活与激活。研究筛选了51种具有不同临床免疫原性发生率的单克隆抗体，以IgG分泌作为免疫原性风险评估的指标。尽管IgG分泌水平在不同测试抗体中存在差异，但其与临床免疫原性评级无明显相关性。该研究揭示了开发基于B细胞的免疫原性风险预测方法所面临的挑战，并为后续优化提供框架。
文献概述
本文《Immunogenicity Risk Assessment of Biotherapeutics Using an Ex Vivo B Cell Assay》，发表于Antibodies杂志，回顾并总结了一种基于B细胞的体外检测方法在生物治疗药物免疫原性风险评估中的应用。文章讨论了现有T细胞增殖检测、MHC相关肽段蛋白组学（MAPP）检测等方法的局限性，指出B细胞作为专业抗原呈递细胞（APC）和抗药物抗体（ADA）的分泌来源，在免疫原性评估中具有重要价值。
背景知识
单克隆抗体（mAbs）因其高靶点特异性、长半衰期及低脱靶效应，已成为治疗癌症、自身免疫病和神经退行性疾病的重要工具。然而，mAbs在临床应用中可能诱导抗药物抗体（ADA）的产生，从而影响药物安全性、药代动力学及疗效。免疫原性风险受多种因素影响，包括mAb的序列、糖基化模式、T/B细胞表位、人源序列同源性、聚集倾向区域（APR）及制剂杂质等。此外，患者相关因素如给药途径、剂量、免疫状态、HLA单倍型等也会影响ADA形成。目前，免疫原性风险预测主要依赖于体外T细胞增殖、树突状细胞内化及MAPP检测，但这些方法无法评估B细胞介导的ADA分泌，可能导致假阴性结果。因此，开发一种能同时评估抗原摄取、T细胞激活及B细胞ADA分泌的综合检测方法，将提升免疫原性风险预测的准确性。
研究方法与实验
研究采用改良的PBMC培养体系，通过添加IL-4、IL-21、BAFF及抗CD40激动抗体，以支持B细胞存活与激活。同时，CD8+ T细胞被耗竭，以促进辅助T细胞功能，从而更贴近体内环境。培养7天后，通过流式细胞术评估B细胞激活标志物（CD80、CD86）、免疫球蛋白类别转换及增殖情况，并采用LEGENDPlex Human Immunoglobulin Isotyping Panel（8-Plex）定量检测培养上清中的IgG分泌水平。
关键结论与观点
研究意义与展望
本研究首次在PBMC培养体系中同时评估T细胞和B细胞对mAb的免疫应答，为开发更全面的免疫原性评估方法提供了实验框架。未来研究可能聚焦于优化培养条件，以提高IgG分泌与临床免疫原性之间的相关性，并探索初始B细胞应答机制。此外，该体系适用于中高通量筛选，具备一定的应用潜力。
结语
本研究开发了一种基于PBMC的B细胞体外培养体系，用于评估单克隆抗体的免疫原性风险。通过添加IL-4、IL-21、BAFF及抗CD40激动抗体，研究者成功诱导B细胞激活、增殖及IgG分泌。然而，IgG分泌水平与临床免疫原性评级无明显关联，提示该体系尚需优化。此外，实验发现高免疫原性mAb（如mAb 1）主要激活记忆B细胞，而初始B细胞应答较弱，这可能限制体系在预测初始免疫原性中的应用。未来工作将聚焦于改进培养条件，以增强初始B细胞响应，并评估不同mAb对T细胞和B细胞的双重影响，从而建立更全面的免疫原性风险评估流程。尽管当前体系尚无法准确预测临床免疫原性，但其为开发更灵敏、更特异的检测方法提供了基础，具有广阔的应用前景。
