小赛推荐：
该研究利用酵母表面展示技术结合磁性细胞分选（MACS）成功筛选出针对CMV pp71抗原的高亲和力、高特异性人源单链抗体（scFv），为CMV相关研究提供新的工具。文章展示了酵母展示技术在抗体开发中的高效性与适用性。
文献概述
本文《Isolation of a Monoclonal Human scFv Against Cytomegalovirus pp71 Antigen Using Yeast Display》，发表于《Antibodies》杂志，回顾并总结了利用酵母表面展示技术筛选特异性抗CMV pp71单链抗体的研究进展，为抗体开发和病毒抗原研究提供了新方法。
背景知识
巨细胞病毒（CMV）是疱疹病毒科的重要病原体，尤其对免疫功能低下人群及新生儿具有严重致病性。pp71蛋白由UL82基因编码，是CMV衣壳相关的重要蛋白，其功能包括启动病毒裂解复制、调控宿主细胞周期及免疫逃逸。由于pp71在病毒生命周期中的关键作用，开发针对该抗原的高特异性单克隆抗体对CMV感染机制研究和诊断工具开发具有重要意义。然而，目前可用的抗pp71单抗有限，传统杂交瘤技术受限于动物免疫及制备周期。近年来，体外抗体展示技术（如噬菌体、核糖体及酵母展示）成为快速筛选抗体片段的有效手段。酵母展示具备真核表达系统的优势，支持正确的二硫键形成及翻译后修饰，适用于筛选具有天然构象的抗体。本研究通过构建人源scFv文库，并利用酵母表面展示结合MACS筛选，成功获得针对pp71的高亲和力抗体，为CMV研究提供了新工具。
赛业生物提供抗体药物研发平台，涵盖全人源抗体小鼠模型构建、抗体筛选与功能验证，助力高亲和力治疗性抗体开发。
研究方法与实验
研究人员从4名健康供体的B细胞中提取RNA，构建人源scFv文库，并将其克隆至pCTCON2载体中，在酵母株AWY101表面表达。通过多轮MACS筛选，富集抗pp71的scFv克隆，并通过流式细胞术、ELISA、免疫荧光及生物层干涉（BLI）等方法验证其特异性与亲和力。随后，将scFv克隆至IgG1 Fc表达载体，构建scFv-Fc融合蛋白，并在HEK293F细胞中表达以用于功能分析。
关键结论与观点
成功构建了多样性丰富的人源scFv文库，并通过酵母表面展示技术实现功能性展示。
通过5轮MACS筛选，获得高亲和力、高特异性的抗pp71单链抗体ID2，其KD值为1.316 ± 0.008 nM。
ID2在流式细胞术、免疫荧光、ELISA及BLI分析中均表现出对pp71的强结合能力，且无非特异性结合。
筛选流程中交替使用不同标签抗体，有效减少筛选偏差，提高富集效率。
ID2可作为研究工具用于CMV感染机制解析、pp71功能研究及抗病毒策略开发。
研究意义与展望
该研究为CMV抗原靶向的抗体开发提供了标准化、可重复的筛选流程，并验证了酵母展示技术在抗病毒抗体开发中的可行性。未来可结合FACS进一步提高筛选通量，并探索ID2在诊断及治疗中的应用潜力。此外，该平台也可用于筛选针对其他病毒抗原的高亲和力抗体，为抗病毒免疫治疗提供基础。
赛业生物提供基因编辑大小鼠模型构建服务，包括多种CMV相关基因编辑模型，支持病毒受体及抗原研究。
结语
本研究通过酵母表面展示结合MACS筛选，成功获得针对CMV pp71蛋白的高亲和力单链抗体ID2。该抗体在多种免疫检测中表现出强特异性，为CMV感染机制研究、诊断及治疗性抗体开发提供了关键工具。酵母展示技术的高效性、真核表达优势及其与磁珠筛选的兼容性，为快速开发抗病毒抗体提供了一条低耗高效路径，具有广泛的应用前景。
文献来源：
